作為光度計(jì)的常見儀器——紫外分光光度計(jì)，是在紫外-可見區(qū)任意選擇不同波長(zhǎng)的光進(jìn)行分光光度檢測(cè)。

分光光度法最重要的物理和化學(xué)量之一是吸光度。為了獲得準(zhǔn)確的研究結(jié)果，準(zhǔn)確測(cè)量樣品溶液的吸光度非常重要。一般來說，分析結(jié)果的不可靠性與偶然性和系統(tǒng)性誤差有關(guān)。偶然誤差會(huì)影響測(cè)量的精度，但可以通過對(duì)足夠數(shù)量的測(cè)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理來減少它。系統(tǒng)誤差影響測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

紫外分光光度計(jì)如何校準(zhǔn)

測(cè)量時(shí)，可以比較一種物質(zhì)在大致相同的實(shí)驗(yàn)條件下的準(zhǔn)確測(cè)量結(jié)果，統(tǒng)一系統(tǒng)誤差。但是，系統(tǒng)(波長(zhǎng)校正、分光光度計(jì)的慢散光、放大器的線性響應(yīng)、比色皿的暗電流和光路)和分光光度計(jì)對(duì)測(cè)得的吸光度的操作誤差(溫度變化、儀器讀數(shù)、操作人員變化、所用物質(zhì)的純度、稱量和濃度、pH)可以檢查和校正。對(duì)于操作誤差，在大多數(shù)情況下，嚴(yán)格按照操作程序測(cè)量、儀器調(diào)零、準(zhǔn)確稱量等可以控制或減少。儀器的系統(tǒng)誤差可以通過定期校準(zhǔn)來克服。分光光度計(jì)。如果需要高精度測(cè)量，則必須每天校準(zhǔn)儀器。

有三種校準(zhǔn)的方法：

吸光度校準(zhǔn)

通常采用一定濃度的極純物質(zhì)溶液作為校正吸光度的標(biāo)準(zhǔn)，該溶液的吸光度系數(shù)由不同的實(shí)驗(yàn)室檢查。為了防止標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度因測(cè)量波長(zhǎng)的微小變化而發(fā)生變化，往往選擇吸收峰較平滑的物質(zhì)。同時(shí)要求溶液穩(wěn)定，在相當(dāng)波長(zhǎng)范圍內(nèi)吸光度的變化符合比爾-朗伯定律。因此，通常使用硫酸銅、硫酸鈷銨和硝酸鈉或硝酸鉀的溶液。鉻酸鉀溶液是最常用的標(biāo)準(zhǔn)溶液。該解決方案適用于紫外和可見光區(qū)域。

波長(zhǎng)或波數(shù)校準(zhǔn)

具有窄吸收帶、過濾器或蒸汽的解決方案可用于校正所需的光波范圍。如果需要高精度，可以使用放電燈泡發(fā)出的輻射進(jìn)行校正。一些光譜儀配備了用于校準(zhǔn)的燈。苯蒸汽也可用于校準(zhǔn)特定范圍的波長(zhǎng)。因此，在測(cè)量時(shí)，可將一小滴苯置于一厘米厚的吸收杯中，測(cè)量其吸收波長(zhǎng)。在遠(yuǎn)紫外區(qū)，可以利用氧的吸收帶進(jìn)行校正。也可以使用各種稀土金屬濾光片，可以快速校正波長(zhǎng)，但精度不如上述方法高。常用的過濾器是含有鈥、釹和鐠離子的過濾器。

雜散光校準(zhǔn)

少量的雜散光往往會(huì)導(dǎo)致較大的測(cè)量誤差?？梢杂媚芡耆漳骋徊ㄩL(zhǎng)的單色光，而對(duì)其他波長(zhǎng)的吸收很微弱的溶液進(jìn)行校正。根據(jù)該方案的透光率可以推斷出雜散光的近似值。雜散光引起的虛假吸收帶也可以通過比爾-朗伯定律來檢驗(yàn)。但是，用這個(gè)定律來檢查假吸收帶有很大的誤差?？梢詮慕刂狗秶獾耐干渎手蝎@得近似百分比的雜散光。如果包含的雜散光大于 0.1%，請(qǐng)嘗試降低它或校正測(cè)量的吸光度。雜散光造成的誤差與雜散輻射成正比，因此可以很容易地從化合物幾乎正確的曲線中計(jì)算出校正值。此外，可以使用適當(dāng)?shù)倪^濾器。濾光片在測(cè)量波長(zhǎng)范圍內(nèi)是完全透明的，但會(huì)吸收該范圍以外的光波，從而消除雜散光。